ТВЕРДОФАЗНЫЙ ПЕПТИДНЫЙ СИНТЕЗ С ТИОЭФИРНЫМИ ЛИНКЕРАМИ

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Упрощенный протокол для введения тиоэфирных фрагментов в пептиды методом SPPS (Solid Phase Peptide Synthesis) с использованием диоктилсульфида или его производных.

2. РЕАГЕНТЫ

• Диоктилсульфид (ДОС) ≥99.1%
• Wang resin или Rink Amide resin (0.5-1.0 ммоль/г)
• Fmoc-аминокислоты, стандартный набор
• HBTU, HOBt, DIPEA (реагенты для сочленения)
• Пиперидин 20% в DMF (снятие Fmoc)
• Коктейль для расщепления: TFA/TIS/H2O (952.52.5)

3. ПРОЦЕДУРА ВКЛЮЧЕНИЯ ТИОЭФИРНЫХ ФРАГМЕНТОВ

3.1. Модификация N-терминуса пептида

Цель: Присоединение диоктильной тиоэфирной группы к N-концу пептида для повышения липофильности и стабильности.

1. Синтезировать пептид стандартным методом SPPS до предпоследней аминокислоты
2. Снять Fmoc-защиту с N-терминуса (20% пиперидин/DMF, 2×10 мин)
3. Активировать октановую кислоту (октаноат):
   • Octanoic acid (3 экв.) + HBTU (3 экв.) + HOBt (3 экв.) в DMF
   • Добавить DIPEA (6 экв.)
   • Перемешать 2 минуты для преактивации
4. Добавить к смоле, встряхивать 2 часа
5. Промыть DMF (5×), DCM (3×)
6. Результат: N-октаноил-пептид (содержит C8 цепь, аналог половины ДОС)

Альтернатива (для полного ДОС-аналога):

• Использовать 3-[(октилсульфанил)пропановую кислоту] вместо октановой кислоты
• Получится N-терминус с тиоэфирным линкером C8-S-C3-CO-пептид

3.2. Модификация боковых цепей

Для пептидов, содержащих лизин (Lys), модифицировать ε-аминогруппу:

1. Использовать Fmoc-Lys(Mtt)-OH (Mtt = 4-метилтритильная защита, селективно удаляется)
2. После сборки пептида селективно снять Mtt с Lys:
   • 1% TFA + 5% TIS в DCM, 3×5 мин
3. Ацилировать свободную ε-NH2 октаноилхлоридом или активированной октановой кислотой
4. Продолжить синтез или расщепить пептид со смолы

4. ХАРАКТЕРИЗАЦИЯ

• ESI-MS: проверить молекулярную массу (прирост на 128 Da за счет октаноильной группы)
• HPLC: увеличение времени удерживания на C18 колонке (повышенная липофильность)

5. ПРИМЕНЕНИЕ

• Повышение мембранной проницаемости пептидов (drug delivery)
• Увеличение периода полураспада в крови
• Синтез липопептидов (противомикробные агенты)